Hur kan en elisa användas för att identifiera bt-majs?

ELISA-tekniken (enzyme-linked immunosorbent assay) kan användas för att identifiera Bt-majs (genetiskt modifierad majs som uttrycker det insekticida proteinet från Bacillus thuringiensis) genom att detektera närvaron av Bt-proteinet i majsprover. Så här fungerar det:

1. Provberedning:Majsprover samlas in och mals till ett fint pulver. Provet extraheras sedan med en buffertlösning för att frigöra proteinerna, inklusive Bt-proteinet.

2. Beläggning av mikrotiterbrunnar:Mikroplattsbrunnar är belagda med en infångningsantikropp som är specifik för Bt-proteinet. Denna antikropp är immobiliserad på ytan av brunnarna.

3. Inkubation med provextrakt:Majsprovextraktet tillsätts till mikroplattans brunnar och inkuberas under en specifik period, vilket gör att Bt-proteinet kan binda till infångningsantikroppen.

4. Tvättsteg:Efter inkubation tvättas brunnarna med en buffertlösning för att avlägsna eventuella obundna substanser.

5. Tillsats av detektionsantikropp:En detektionsantikropp, som är konjugerad till ett enzym (vanligtvis pepparrotsperoxidas), tillsätts till brunnarna. Denna detektionsantikropp är specifik för en annan epitop av Bt-proteinet än infångningsantikroppen.

6. Andra inkubationen:Mikroplattan inkuberas igen, vilket gör att detektionsantikroppen kan binda till Bt-proteinet som fångas upp av infångningsantikroppen.

7. Substrattillsats:En substratlösning, specifik för enzymet konjugerat till detektionsantikroppen, tillsätts till brunnarna. I närvaro av enzymet genomgår substratet en reaktion som ger en färgad eller fluorescerande produkt.

8. Kolorimetrisk eller fluorometrisk detektion:Absorbansen (för kolorimetrisk detektion) eller fluorescensen (för fluorometrisk detektion) för varje brunn mäts med hjälp av en mikroplattläsare.

9. Dataanalys:De erhållna absorbans- eller fluorescensvärdena jämförs med en standardkurva genererad med användning av kända koncentrationer av Bt-proteinet. Detta möjliggör kvantifiering av Bt-proteinet som finns i majsprovet.

Genom att detektera närvaron och kvantiteten av Bt-proteinet kan ELISA användas för att identifiera och differentiera Bt-majs från icke-Bt-majsprover. Positiva resultat indikerar närvaron av Bt-proteinet, medan negativa resultat tyder på frånvaron av Bt-proteinet eller nivåer under analysens detektionsgräns.