Kuinka Elisaa voidaan käyttää bt-maissin tunnistamiseen?

ELISA-tekniikkaa (entsyymi-immunosorbenttimääritys) voidaan käyttää Bt-maissin (geneettisesti muunneltu maissi, joka ekspressoi Bacillus thuringiensis -bakteerin hyönteismyrkkyproteiinia) tunnistamiseen havaitsemalla Bt-proteiinin läsnäolo maissinäytteistä. Näin se toimii:

1. Näytteen valmistus:Maissinäytteet kerätään ja jauhetaan hienoksi jauheeksi. Näyte uutetaan sitten puskuriliuoksella proteiinien vapauttamiseksi, mukaan lukien Bt-proteiini.

2. Mikrolevyn kuoppien päällystäminen:Mikrolevyn kuopat päällystetään Bt-proteiinille spesifisellä sieppausvasta-aineella. Tämä vasta-aine on immobilisoitu kuoppien pinnalle.

3. Inkubointi näyteuutteen kanssa:Maissinäyteuute lisätään mikrolevyn kuoppiin ja inkuboidaan tietyn ajan, jolloin Bt-proteiini voi sitoutua sieppausvasta-aineeseen.

4. Pesuvaiheet:Inkuboinnin jälkeen kuopat pestään puskuriliuoksella sitoutumattomien aineiden poistamiseksi.

5. Detektiovasta-aineen lisääminen:Detektiovasta-aine, joka on konjugoitu entsyymiin (yleensä piparjuuriperoksidaasiin), lisätään kuoppiin. Tämä detektiovasta-aine on spesifinen Bt-proteiinin eri epitoopille kuin sieppausvasta-aine.

6. Toinen inkubointi:Mikrolevyä inkuboidaan uudelleen, jolloin detektiovasta-aine voi sitoutua sieppausvasta-aineen vangitsemaan Bt-proteiiniin.

7. Substraatin lisäys:Substraattiliuos, joka on spesifinen detektiovasta-aineeseen konjugoidulle entsyymille, lisätään kuoppiin. Entsyymin läsnä ollessa substraatti käy läpi reaktion, joka tuottaa värillisen tai fluoresoivan tuotteen.

8. Kolorimetrinen tai fluorometrinen havaitseminen:Kunkin kuopan absorbanssi (kolorimetristä havaitsemista varten) tai fluoresenssi (fluorometristä havaitsemista varten) mitataan käyttämällä mikrolevylukijaa.

9. Tietojen analyysi:Saatuja absorbanssi- tai fluoresenssiarvoja verrataan standardikäyrään, joka on muodostettu käyttämällä tunnettuja Bt-proteiinin pitoisuuksia. Tämä mahdollistaa maissinäytteessä olevan Bt-proteiinin kvantifioinnin.

Havainnoimalla Bt-proteiinin läsnäolo ja määrä, ELISAa voidaan käyttää Bt-maissin tunnistamiseen ja erottamiseen ei-Bt-maissinäytteistä. Positiiviset tulokset osoittavat Bt-proteiinin läsnäolon, kun taas negatiiviset tulokset viittaavat Bt-proteiinin puuttumiseen tai määrityksen havaitsemisrajan alapuolelle.