Ako možno použiť elisa na identifikáciu bt kukurice?

Technika ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) sa môže použiť na identifikáciu Bt kukurice (geneticky modifikovaná kukurica exprimujúca insekticídny proteín z Bacillus thuringiensis) detekciou prítomnosti Bt proteínu vo vzorkách kukurice. Funguje to takto:

1. Príprava vzorky:Vzorky kukurice sa odoberú a rozomelú na jemný prášok. Vzorka sa potom extrahuje tlmivým roztokom, aby sa uvoľnili proteíny, vrátane proteínu Bt.

2. Potiahnutie jamiek mikrodoštičky:Jamky mikrodoštičky sú potiahnuté zachytávacou protilátkou špecifickou pre Bt proteín. Táto protilátka je imobilizovaná na povrchu jamiek.

3. Inkubácia s extraktom zo vzorky:Extrakt zo vzorky kukurice sa pridá do jamiek mikrodoštičky a inkubuje sa špecifickú dobu, čo umožní proteínu Bt naviazať sa na zachytávaciu protilátku.

4. Kroky premývania:Po inkubácii sa jamky premyjú tlmivým roztokom, aby sa odstránili všetky nenaviazané látky.

5. Pridanie detekčnej protilátky:Detekčná protilátka, ktorá je konjugovaná s enzýmom (zvyčajne chrenovou peroxidázou), sa pridá do jamiek. Táto detekčná protilátka je špecifická pre iný epitop Bt proteínu ako zachytávacia protilátka.

6. Druhá inkubácia:Mikroplatnička sa znovu inkubuje, čo umožní detekčnej protilátke naviazať sa na Bt proteín zachytený zachytávacou protilátkou.

7. Pridanie substrátu:Do jamiek sa pridá roztok substrátu, špecifický pre enzým konjugovaný s detekčnou protilátkou. V prítomnosti enzýmu substrát prechádza reakciou, ktorá vytvára farebný alebo fluorescenčný produkt.

8. Kolorimetrická alebo fluorometrická detekcia:Absorbancia (pre kolorimetrickú detekciu) alebo fluorescencia (pre fluorometrickú detekciu) každej jamky sa meria pomocou čítačky mikrodoštičiek.

9. Analýza údajov:Získané hodnoty absorbancie alebo fluorescencie sa porovnajú so štandardnou krivkou vytvorenou použitím známych koncentrácií proteínu Bt. To umožňuje kvantifikáciu Bt proteínu prítomného vo vzorke kukurice.

Detegovaním prítomnosti a množstva Bt proteínu možno použiť ELISA na identifikáciu a odlíšenie Bt kukurice od iných vzoriek kukurice. Pozitívne výsledky naznačujú prítomnosť Bt proteínu, zatiaľ čo negatívne výsledky naznačujú neprítomnosť Bt proteínu alebo hladiny pod detekčným limitom testu.